【一、食品安全行業(yè)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)背景與需求】

伴隨著國(guó)家針對(duì)食品安全監(jiān)管力度持續(xù)不斷地強(qiáng)化開(kāi)展, 在食品安全相關(guān)要素的檢測(cè)范疇之內(nèi), 已然從以往傳統(tǒng)意義上的定性篩查, 朝向準(zhǔn)確化的定量分析方向, 進(jìn)行了多維度的全面升級(jí)。依據(jù)《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中獸藥殘留限度》（GB 31650 - 2019）以及《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中真菌毒素限度》（GB 2761 - 2017）等一系列具有強(qiáng)制性特征的標(biāo)準(zhǔn)相應(yīng)要求, 在食品安全檢測(cè)所涉及的食品中, 獸藥殘留、抗生素、真菌毒素等各類有害物質(zhì)的檢測(cè)項(xiàng)目，日益呈現(xiàn)出細(xì)化的態(tài)勢(shì), 并且檢測(cè)限值持續(xù)不斷地進(jìn)行收嚴(yán)操作。行業(yè)實(shí)驗(yàn)室面臨著核心挑戰(zhàn), 那就是, 要面對(duì)怎樣處理保證數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性這件事，與此同時(shí), 還要提升批量樣品檢測(cè)通量。這并不簡(jiǎn)單, 在此階段內(nèi), 還務(wù)必要設(shè)法縮短檢測(cè)周期。并且, 儀器設(shè)備長(zhǎng)期穩(wěn)定運(yùn)行所帶來(lái)的持續(xù)穩(wěn)定狀態(tài)也要維持住。同時(shí), 要把維護(hù)成本通過(guò)有效的辦法控制在合理范圍之內(nèi)的難度也不小。傳統(tǒng)比色法, 其檢測(cè)已存在困難, 半定量試紙條檢測(cè)同樣如此, 難以符合法規(guī)對(duì)于定量結(jié)果抱有的高要求。所以, 酶標(biāo)儀成為了標(biāo)準(zhǔn)化檢測(cè)工具, 它是基于酶免疫吸附法的。在獸藥殘留、真菌毒素、違禁添加物等具體項(xiàng)目的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)實(shí)施過(guò)程里, 正一步一步慢慢變成主流配置。以光學(xué)性能穩(wěn)定, 其特點(diǎn)為軟件功能全面, 操作具備人性化等, 萊恩德酶標(biāo)儀為行業(yè)用戶提供了一套適應(yīng)國(guó)標(biāo)要求這樣的系統(tǒng)化實(shí)驗(yàn)方案。

【二、實(shí)驗(yàn)所需儀器與試劑】

核心儀器：萊恩德LD-D96酶標(biāo)儀

本方案推薦選用萊恩德LD - D96酶標(biāo)儀當(dāng)作核心檢測(cè)設(shè)備, 該儀器有著8通道垂直光路設(shè)計(jì)，能夠?qū)崿F(xiàn)96孔板的高通量同步讀數(shù), 單次檢測(cè)周期能夠控制在數(shù)分鐘以內(nèi), 顯著提升實(shí)驗(yàn)室批處理能力。它的讀數(shù)范圍是從0到4.000Abs, 線性范圍為0至3.000Abs, 與波長(zhǎng)范圍在400 - 1000nm的光學(xué)系統(tǒng)相配合, 能夠兼容市面上絕大多數(shù)ELISA試劑盒的檢測(cè)波長(zhǎng)需求。儀器的示值誤差處于小于等于加減零點(diǎn)零二Abs以內(nèi), 穩(wěn)定性處于小于等于加減零點(diǎn)零零三Abs, 重復(fù)性的CV占比處于小于等于百分之零點(diǎn)三的范圍, 正是這樣組合而成的一系列精密度方面所屬的參數(shù), 切實(shí)保障了在同一批次內(nèi)部以及從不同批次之間其針對(duì)檢測(cè)數(shù)據(jù)所具備的可重復(fù)性, 從而得以滿足實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量方向的控制需求以及數(shù)據(jù)溯源方向的要求。除此以外, LD-D96配備了大于或等于7寸的彩色液晶觸摸屏, 有著全中文的操作界面, 支持可視化布板以及整板測(cè)量信息的顯示, 內(nèi)置專業(yè)的酶標(biāo)儀軟件, 可以存儲(chǔ)大于或等于500組程序, 也可存儲(chǔ)大于或等于10000個(gè)樣本結(jié)果, 數(shù)據(jù)計(jì)算模式包含吸光度、線性方程、對(duì)數(shù)方程、二次方程、三次方程、樣條函數(shù)、抑止率等內(nèi)容, 全部覆蓋了ELISA法所需要的曲線擬合與定量分析功能。儀器配備了DC12V 22W的進(jìn)口鹵素?zé)艄庠? 而且擁有電源管理功能, 它在讓光源壽命得以延長(zhǎng)的情況下, 還使長(zhǎng)期運(yùn)行的電耗成本降了下來(lái)。

配套試劑與耗材

本實(shí)驗(yàn)所需要的配套試劑以及耗材, 盡皆屬于ELISA檢測(cè)通用的品類范疇, 用戶能夠依據(jù)檢測(cè)項(xiàng)目, 像是β -受體激動(dòng)劑、四環(huán)素類、黃曲霉毒素B1等等這樣的項(xiàng)目, 自行去采購(gòu)與之對(duì)應(yīng)的試劑盒。常規(guī)的耗材清單涵蓋: 96孔酶標(biāo)板, 這里建議選用高吸附型的；移液器以及配套的吸頭, 既有單道的又有多道的；處于37℃±0.5℃環(huán)境的恒溫培養(yǎng)箱；用來(lái)增加洗滌一致性的洗板機(jī), 此為可選擇配備而非必需；去離子水抑或是超純水；樣本稀釋液以及洗滌緩沖液, 一般是由試劑盒予以提供的。選擇試劑盒, 應(yīng)優(yōu)先去確認(rèn), 其檢測(cè)波長(zhǎng)是不是處在LD-D96酶標(biāo)儀的濾光片可裝載范圍之內(nèi), 該儀器多能夠裝載15片濾光片, 用戶能夠依據(jù)日常檢測(cè)項(xiàng)目, 靈活去配置對(duì)應(yīng)波長(zhǎng)的濾光片, 以此實(shí)現(xiàn)一機(jī)多用途。

【三、標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)操作方法】

樣品前處理

依照所買(mǎi)進(jìn)試劑盒說(shuō)明書(shū)給出的要求, 針對(duì)待測(cè)的食品樣品展開(kāi)均質(zhì)操作, 開(kāi)展提取操作, 進(jìn)行凈化操作以及實(shí)施濃縮操作。舉例來(lái)說(shuō), 對(duì)于肉制品里面瘦肉精類殘留的檢測(cè)工作, 要把樣品切碎之后使用乙酸乙酯或者甲醇 - 鹽酸溶液來(lái)提取 , 經(jīng)過(guò)離心分離之后獲取上清液, 把pH值調(diào)節(jié)到中性, 接著借助固相萃取柱進(jìn)行凈化。前處理過(guò)程之中的每一個(gè)步驟都應(yīng)當(dāng)嚴(yán)格把控時(shí)間以及溫度, 防止目標(biāo)物降解或者產(chǎn)生交叉污染。

儀器準(zhǔn)備與設(shè)置

啟動(dòng)萊恩德 LD-D96 酶標(biāo)儀, 等儀器自己檢查完畢且穩(wěn)定 10 分鐘之后再開(kāi)展測(cè)試。于觸摸屏上挑選對(duì)應(yīng)項(xiàng)目的檢測(cè)程序, 預(yù)先設(shè)定主波長(zhǎng)和參比波長(zhǎng)（像是 450nm / 630nm）, 設(shè)置振板參數(shù): 振板速度選取中級(jí)（2 級(jí)）, 振板時(shí)間規(guī)定為 5 秒, 借此保證反應(yīng)液在孔內(nèi)混合均勻, 不過(guò)要防止過(guò)強(qiáng)振板致使液滴濺出。要是采用動(dòng)力學(xué)模式測(cè)定酶促反應(yīng)速率, 得同時(shí)設(shè)定讀數(shù)間隔時(shí)間（例如每 30 秒讀一回, 持續(xù) 10 分鐘）。

實(shí)驗(yàn)操作步驟

每孔按50到100微升的量, 把標(biāo)準(zhǔn)品和處理后的樣品依次加到酶標(biāo)板相應(yīng)孔位, 要留意更換移液器尖嘴以防交叉混雜, 加了酶標(biāo)抗體或者酶結(jié)合物后, 蓋上封板薄膜, 放置在37攝氏度的恒溫培養(yǎng)箱里孵育30至60分鐘，孵育完后, 用洗板機(jī)或者手動(dòng)開(kāi)展洗滌事宜, 洗滌次數(shù)通常是5次, 每次注入300微升洗滌液, 停留30秒鐘后使之干噪, 接著加入顯色底物溶液比如TMB，在黑暗中顯色15分鐘, 顯色完畢后, 馬上加入終止液如2M硫酸停止反應(yīng)。先把酶標(biāo)板放置到LD - D96儀器的載板架那兒, 要保證板體是平平整整的沒(méi)有出現(xiàn)傾斜狀況, 再去點(diǎn)擊“開(kāi)始讀數(shù)”這個(gè)按鈕, 如此一來(lái)儀器就會(huì)自動(dòng)把全板的吸光度測(cè)量工作給完成, 并且還會(huì)將原始數(shù)據(jù)保存下來(lái)。

數(shù)據(jù)采集與處理

儀器完成讀數(shù)之后, 能夠在觸摸屏之上即時(shí)查看各個(gè)孔的吸光度數(shù)值以及整板測(cè)量信息。借助內(nèi)置軟件選擇“抑止率”或者“濃度”計(jì)算模式, 系統(tǒng)會(huì)依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品濃度自動(dòng)擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線（推薦采用四參數(shù)Logistic回歸模型）, 并且反算出各個(gè)樣品孔的目標(biāo)物濃度。用戶還能夠?qū)⒔Y(jié)果導(dǎo)出至U盤(pán)或者通過(guò)外接打印機(jī)直接打印檢測(cè)報(bào)告, 報(bào)告內(nèi)容涵蓋樣品編號(hào)、檢測(cè)項(xiàng)目、實(shí)測(cè)濃度、判定結(jié)論以及標(biāo)準(zhǔn)曲線圖譜。

【四、實(shí)驗(yàn)結(jié)論與方案優(yōu)勢(shì)】

本實(shí)驗(yàn)方案是以萊恩德LD-D96酶標(biāo)儀當(dāng)作核心, 跟通用ELISA檢測(cè)試劑盒整合, 能夠有效地做完食品內(nèi)獸藥殘留、抗生素、真菌毒素等高風(fēng)險(xiǎn)指標(biāo)的定量檢測(cè)工作的。依照實(shí)驗(yàn)得出來(lái)的數(shù)據(jù)展現(xiàn), 那一儀器只是針以及處于0到3.000Abs線性范限以內(nèi)的時(shí)候才具備優(yōu)良的線性相關(guān)性, 標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)R2大體上都能夠達(dá)到0.995以上, 這是吻合國(guó)標(biāo)對(duì)于準(zhǔn)確完成定量檢測(cè)的要求的。LD - D96酶標(biāo)儀具備高重復(fù)性, 其CV≤0.3%, 存在低穩(wěn)定性漂移, 這確保了同一樣品多次檢測(cè)結(jié)果具備一致性, 也具備可復(fù)現(xiàn)性, 格外適合用于實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部質(zhì)量控制, 還適合用于擴(kuò)項(xiàng)認(rèn)證時(shí)的數(shù)據(jù)支撐。在操作層面, 該儀器靠著一鍵式檢測(cè)流程跟中文可視化界面, 極大地降低了操作人員的培訓(xùn)門(mén)檻。單機(jī)就能完成曲線標(biāo)定、數(shù)據(jù)存儲(chǔ)和報(bào)告輸出, 不用去額外配置電腦就能獨(dú)立運(yùn)行, 切實(shí)提升了實(shí)驗(yàn)室單日檢測(cè)通量。站在行業(yè)用戶的角度來(lái)看, 該方案在滿足食品安全國(guó)標(biāo)檢測(cè)要求的情形下, 能夠降低儀器采購(gòu)和運(yùn)維的綜合成本。LD-D96采用模塊化設(shè)計(jì), 日常維護(hù)只需定期清潔濾光片以及更換鹵素?zé)? 不存在復(fù)雜耗材更換需求。總體說(shuō)來(lái), 萊恩德LD-D96酶標(biāo)儀予以食品安全檢測(cè)行業(yè), 一套準(zhǔn)確的, 并且高效的, 還合規(guī)的智能化實(shí)驗(yàn)解決方案。

【五、參考文獻(xiàn)/相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)】

1. 國(guó)標(biāo)31650, 2019年版的食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn), 關(guān)于食品當(dāng)中獸藥殘留限度。

2. 食品中真菌毒素限度方面的食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn), 是GB 2761 - 2017。

3. GB/T 21311 至 2007 標(biāo)準(zhǔn), 用于測(cè)定動(dòng)物源性食品里硝基呋喃類藥物代謝物殘留量, 采用免疫親和柱凈化與高效液相色譜法。

4. 為測(cè)定動(dòng)物源性食品中多種β -受體激動(dòng)劑殘留量, 所采用的辦法是液相色譜 - 串聯(lián)質(zhì)譜法, 其依據(jù)的標(biāo)準(zhǔn)乃是GB/T 22286 - 2008。

5. 采用酶聯(lián)免疫吸附法的通用技術(shù)規(guī)范, 此準(zhǔn)則編號(hào)被定義為SN/T 1811 - 2006。

6. 萊恩德LD-D96酶標(biāo)儀使用說(shuō)明書(shū)及技術(shù)參數(shù)手冊(cè)